A)

Colete os indivíduos adultos utilizando uma rede entomológica ao longo das fileiras de um pomar, selecionado para amostragem. Os insetos também podem ser coletados diretamente utilizando um aspirador, caso a densidade populacional seja baixa. Ninfas (do 4º ínstar) podem ser coletadas cortando-se a parte inferior da folha. Transporte os insetos ou o material vegetal em uma caixa térmica até o laboratório para evitar a exposição a temperaturas extremas. Os adultos devem ser mantidos em plantas cítricas ou planta de murta até o momento do uso. As ninfas podem ser mantidas no material vegetal, com os caules inseridos em água, até o momento do uso.

B)

Prepare o ágar, misturando 1,5% (p/p) de ágar em pó em água destilada e aquecendo até ferver. Deixe a solução esfriar, mexendo constantemente. Após esfriar por aproximadamente 10 minutos, despeje de 3 a 5 ml de solução de ágar em placas de Petri para formar uma camada sólida (de 3 a 4 mm de espessura). Observação: Diferentes marcas de ágar em pó podem exigir concentrações diferentes de 1,5% para formar uma camada sólida; certifique-se de determinar a concentração apropriada antes de iniciar o estudo.

C)

Colete folhas cítricas limpas e não tratadas, para cortar discos foliares (6 cm de diâmetro).

D)

Prepare um número adequado de diluições dos produtos-teste em água contendo 0,2% de óleo mineral, visando melhor cobertura dos discos foliares. Para cálculo da relação dose-resposta (por exemplo, LC₅₀ ou LC₉₀), são necessárias pelo menos 5 a 6 concentrações que abranjam uma gama de mortalidade, desde baixa a alta (incluindo um controle).

E)

Agite os líquidos de teste e, em seguida, mergulhe os discos foliares individualmente por 30 segundos. Repita cada tratamento pelo menos três vezes. Utilize com controle uma amostra contendo apenas o solvente, sem inseticida.

F)

Deixe a água da superfície dos discos de folhas secar antes de colocá-los individualmente nas placas de Petri (a camada de ágar manterá o disco foliar úmido durante todo o período do estudo).

G)

Infeste cada placa com 20 a 25 adultos ou ninfas (mas não uma mistura dos dois) usando um pincel de pelo de camelo ou um aspirador, e depois sele as placas de Petri com Parafilme. Bolsas de gelo ou dióxido de carbono podem ser usados para diminuir a atividade dos adultos e facilitar a transferência destes para os discos de folhas tratados em placas de Petri.

H)

Armazene as placas de Petri em temperatura ambiente, longe da luz solar direta e de temperaturas extremas. Registre as temperaturas máximas e mínimas.

I)

Avalie a mortalidade. O tempo de avaliação pode variar de 24 a 96 horas, dependendo do Modo de Ação do produto. Insetos flácidos, ressecados, de coloração clara e incapazes de se mover ou retornar à posição normal após o toque com um pincel, devem ser considerados mortos.

J)

Expresse os resultados como porcentagem de mortalidade, corrigindo para a mortalidade do grupo ‘não tratado’ (controle) usando a fórmula de Abbott. Os dados de mortalidade são submetidos a uma análise de resposta à dose probit ou logit para fornecer LC₅₀ ou LC₉₀.