A)

Coletar os percevejos adultos em vários locais, de maneira aleatória na área infestada. Manter os insetos em recipientes arejados. Certifique-se que os insetos não fiquem excessivamente expostos a situações de estresses após a coleta, como variações abruptas de temperatura, falta ou excesso de umidade e falta de alimentação. Transportar os insetos para o laboratório assim que possível.

Observação: Utilize uma ficha uma ficha para reportar os detalhes das amostragens e outras informações que podem ser úteis para a rastreabilidade das amostras e posterior interpretação dos resultados de suscetibilidade.

B)

Após a chegada no laboratório, mantenha os insetos em gaiolas contendo dieta apropriada, com feijão-vagem (P. vulgaris) e uma mistura de sementes de soja, amendoim e girassol. Manter os insetos no laboratório de um dia para o outro, antes da instalação dos bioensaios.

C)

Preparar as arenas de teste colocando o papel filtro sobre o fundo das placas de Petri, umedecendo-as com 1 ml de água destilada.

D)

Transferir 5 adultos de percevejo em cada placa de Petri. Cada placa é considerada uma parcela. Realizar quatro repetições para cada concentração de inseticida. Preparar 4 repetições adicionais para o tratamento testemunha/controle.

E)

Antes de iniciar a instalação do bioensaio, lavar as vagens de feijão frescas (P. vulgaris) com uma solução de 1% de água sanitária e deixar secar. Cortar cada vagem em 2–3 pedaços (4 a 5 cm de comprimento).

F)

Preparar as diluições das concentrações em água; a utilização de adjuvante não é necessária. Selecionar a série de concentrações para obter os resultados de mortalidade que possibilite a construção da curva de dose resposta do(s) inseticida(s) avaliado(s). São recomendadas no mínimo 5–6 concentrações. O volume final de 100 ml deve ser suficiente para a instalação do bioensaio. Adotar um tratamento testemunha/controle contendo solução sem inseticida.

G)

Agitar as soluções dos tratamentos e mergulhar completamente um pedaço de vagem de feijão na solução. Mantenha o pedaço de vagem submersa por um tempo de 3 a 5 segundos. Coloque as vagens tratadas sobre o papel toalha até secarem.

H)

Acrescente 3 pedaços de vagens tratadas em cada placa de Petri. Mantenha as placas de Petri em um local onde não haverá exposição a temperaturas extremas. Registre a temperatura máxima e mínima.

I)

Avaliar a mortalidade às 96 horas após a exposição ao inseticida. Contar o número de percevejos mortos e moribundos. Corrigir a mortalidade de acordo com o tratamento controle utilizando a fórmula de Abbott (1925). Estimar as concentrações letais utilizando análise de Probit, para determinação da CL50, CL90 ou CL99. Se a mortalidade no tratamento controle exceder 20%, o estudo deve ser considerado inválido para caracterização da linha básica de suscetibilidade e monitoramento da resistência.