A)

Coletar uma amostra representativa de insetos em um campo. Podem ser adultos, larvas adequadas para testes imediatos ou ovos/larvas L1 para criação até o estágio apropriado, ou ainda material a partir do qual uma população F1 para testes possa ser criada. Os insetos não devem ser submetidos a estresse por temperatura, umidade ou fome após a coleta.

B)

Recolha uma quantidade suficiente de folhas não infestadas e não tratadas. As folhas inteiras são preferíveis ou, para algumas culturas, as porções distais. Não deixe as folhas murcharem.

C)

Prepare diluições precisas do composto de teste a partir do produto comercial identificado. Para estudos iniciais, recomenda-se o uso de cinco taxas de amostragem amplamente espaçadas. A utilização de umectante adicional é recomendada apenas para material foliar altamente ceroso, caso em que essa solução umectante é usada na solução "não tratada" (controle) em vez de apenas água.

D)

Mergulhe as folhas individualmente no líquido de teste por 5 segundos, agitando suavemente, e coloque-as para secar superficialmente sobre papel toalha. Não deixe as folhas murcharem. Mergulhe o mesmo número de folhas por tratamento e trate material foliar suficiente para evitar estresse por falta de nutrientes no grupo “não tratado” durante o teste. Comece mergulhando a amostra “não tratada” e vá progredindo até as diluições de teste.

E)

Coloque as folhas tratadas e secas na superfície nos recipientes de teste etiquetados, que devem ser adequados para armazenar material foliar suficiente e em boas condições por até 3 dias.

F)

Adicione números iguais de larvas neonatas (Heliothis/Helicoverpa), Larvas L2 recém-mudadas ou adultos são colocados em cada recipiente, de forma que um total mínimo de 40 insetos seja usado por tratamento, divididos entre pelo menos quatro recipientes replicados. Se apenas uma superfície da folha estiver acessível aos insetos, certifique-se de que seja a correta para a espécie em questão. Se o canibalismo for um problema (por exemplo, Heliothis e Helicoverpa spp.), reduza o número de insetos por recipiente, mas aumente a replicação.

G)

Guarde os recipientes em um local onde não fiquem expostos à luz solar direta ou a temperaturas extremas. Registre as temperaturas máximas e mínimas. Se possível, é preferível uma temperatura média de 25°C.

H)

No caso de compostos de ação rápida, uma avaliação final da mortalidade dos insetos² é feita após 48 h. Para compostos de ação lenta (por exemplo, benzoilureias, reguladores de crescimento de insetos etc.), uma primeira avaliação é feita em 72 h, quando as folhas são trocadas por folhas frescas tratadas, como antes, com a diluição apropriada do inseticida. Os recipientes são mantidos por um período adicional antes da avaliação final, seja por 72 h ou até que os insetos do grupo “não tratado” (controle) tenham trocado de pele novamente.

I)

Expresse os resultados como porcentagem de mortalidade, corrigindo para a mortalidade do grupo “não tratado” (controle) usando a fórmula de Abbott. A mortalidade não tratada deve ser registrada.